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Aureobasidin A(AbA)金擔(dān)子素A (1mg/ml)

貨號(hào) M0129 售價(jià)(元) 1378
規(guī)格 1mg CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品信息

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格

M0129-1mg

Aureobasidin AAbA)金擔(dān)子素A

1mg

1378

M0129-5mg

Aureobasidin AAbA)金擔(dān)子素A

5*1mg

4129

M0129-10mg

Aureobasidin AAbA)金擔(dān)子素A (凍干粉)

10mg

6800元







產(chǎn)品簡介

金擔(dān)子素AAureobasidin AAbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素,具有很強(qiáng)的抗真菌能力。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性。對(duì)其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機(jī)制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而進(jìn)一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因,以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性。通過對(duì)這些編碼基因進(jìn)行突變即可使得菌株對(duì)AbA產(chǎn)生抗性,如AUR1-C基因。

AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子。本品為溶于甲醇的AbA溶液,濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細(xì)胞的敏感度(見表1. AbA對(duì)各種酵母菌的最低抑菌濃度(MIC))。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式

C60H92N8O11

分子量)

1100

純度

95%

熔點(diǎn)

155-157

冰袋運(yùn)輸。4℃保存。

操作步驟(抗AbA的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng))

1)加入0.5 ml過夜培養(yǎng)的酵母到50 ml YPD培養(yǎng)基中(配方:1L液體培養(yǎng)基含有10g yeast extract20g polypeptone, 20g D-glucose;固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂;)。

2)30℃培養(yǎng)約6小時(shí),測定OD66012。使用二倍體時(shí),測定OD66024。

3)1,000×g離心5分鐘

4)用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)懸浮沉淀,1,000×g離心5分鐘。

5)用Solution A重懸沉淀,直到OD660150。

6)在管內(nèi)分取100 μl細(xì)胞懸浮液,30℃培養(yǎng)1小時(shí)。

7)加入5 μg載體(環(huán)狀或線性DNA)和150 μg Carrier DNA(已經(jīng)過100℃加熱10分鐘,并迅速冷卻)。

【注】:pAUR101需使用線性DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀DNA會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成功。pAUR112pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

8)加入850 μl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,需要現(xiàn)用現(xiàn)配),輕輕混勻。

9)30℃培養(yǎng)30分鐘后,42℃培養(yǎng)15分鐘。

10)室溫放置10分鐘。

11)5,000 rpm離心1分鐘,用5 ml YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀。

12)30℃培養(yǎng)6小時(shí)~過夜。

13)5,000~10,000 rpm離心,用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

14)在YPD選擇培養(yǎng)基平板(含有一定濃度的AbA,依菌株類型而定)上接種100 μl細(xì)胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉(zhuǎn)化完成。

15)挑取陽性轉(zhuǎn)化子,和/或測定轉(zhuǎn)化效率(以每微克質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來表示)。

注意事項(xiàng)

1)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2)AbA的最佳工作濃度因宿主細(xì)胞不同而有差異,可根據(jù)最低抑菌濃度(MIC)來確定。

1 Aureobasidin 對(duì)各種酵母菌的最低抑菌濃度

菌株

MICμg/ml

S.cerevisiae

ATCC9763diploid

0.2-0.4

SH3328haploid

0.1

Sake yeastdiploid

0.1-0.2

Shochu yeastdiploid

0.1

Beer yeasttriploid or tetraploid

0.1

Bakers yeastdiploid

0.2-0.4

Schizo.pombe

JY-745monoploid

0.1

C.albicans

TIMM-0136diploid

0.04

C.tropicalis

TIMM-0324diploid

0.08










相關(guān)產(chǎn)品:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格

M6090

X-Gal

1g

426

M5831-100mg

X-α-Gal

100mg

1280

M5831-250mg

X-α-Gal

250mg

2199

M6492

Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青霉素鈉

25g

1998

M3459

Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青霉素鈉

100g

750

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