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RNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)-II

貨號 WLRN8209KIT 售價(元) 2500
規(guī)格 48T(50ul) CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關產(chǎn)品

RNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)-99使用說明書

(貨號:WLRN8209KIT

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術:在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈,反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。依賴nfo酶的作用,加入根據(jù)模版設計的特異的分子探針,使用膠體金技術(三明治夾心法)可以對最終結果進行檢測。

產(chǎn)品特點:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短(僅需12 mins)等優(yōu)點,反應組分為干粉狀態(tài),操作簡便,易于保存。

本試劑對設備要求低,金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作,無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設備。

引物設計:

建議使用長度在 30-35 bp的引物,引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度;下游引物的5’端標記一個修飾基團(常用生物素)。引物設計避免形成二級結構而影響擴增;擴增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

熒光探針設計:

在上下游引物中間,設計一段長度為46-52nt與目的片段互補的序列;5’端修飾一個抗原標記(典型FAM); 在5’端和3’末端的中部位置標記一個dSpacer(四氫呋喃,THF),作為nfo的識別位點;3’末端標記一個修飾基團,例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer等。

試劑盒組成:

組成

含量

A buffer

1.6 mL×1

B buffer

150 μL×1

試劑

48

使用說明書

1

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復凍融;

產(chǎn)品有效期:14個月。


操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻。

1)    每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混勻,否則會對實驗效果產(chǎn)生影響);

2)    每個反應管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針(引物和探針濃度為10 μM,對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中);

3)    向反應管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積,并相應調(diào)整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為13.5 μL);

4)    最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(對于多個反應,建議將B buffer加至反應管的蓋子內(nèi)側(cè),上下顛倒反應管8-10次混勻);

5)    混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應管放入恒溫設備中37-39 oC孵育8-12 mins;

6)    反應結束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的離心管中,混合均勻后,將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡,5 mins內(nèi)觀察質(zhì)控線與檢測線判讀結果。

體系配制

組分

體積(μL

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)

2

下游引物(10 μM)

2

探針(10 μM)

0.6

ddH2O和核酸模板

13.5

B buffer

2.5

總體積

50

注意事項:

1.  由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應時請注意避免微量核酸污染,并盡量考慮設置空白對照以確認是否有核酸污染。

2.  試劑盒保質(zhì)期12個月。每次使用時,請取出實驗所需的MIRA反應單元的數(shù)量,置于冰浴條件下并在8小時內(nèi)使用;剩余部分,請置于存儲條件下。

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產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

目錄價格

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