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Collagenase III 膠原酶III型

貨號(hào) J1411 售價(jià)(元) 540
規(guī)格 100mg CAS號(hào) 9001-12-1
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

單價(jià)/

J1411

Collagenase III 膠原酶III

100mg

540

J1431

Collagenase III 膠原酶III

1g

3300

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

膠原酶(Collagenase,CAS NO. 9001-12-1)是一種蛋白水解酶,常用來(lái)消化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶,膠原酶特異性識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(高頻出現(xiàn)在膠原collagen,很少在其他蛋白中發(fā)現(xiàn))并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶,膠原酶是唯一一種可識(shí)別并降解具三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織。

商業(yè)化膠原酶來(lái)源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維;還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分別用以水解存在結(jié)蹄組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)等。目前商業(yè)化的膠原酶因所含組分的差異分為五類(lèi),其在應(yīng)用上具有一定區(qū)分,詳見(jiàn)表1。

本品是III型膠原酶,活性≥100 units/mg凍干物,含較低的次級(jí)蛋白酶污染物水解活性,但具典型的膠原酶活性。常用于乳腺組織的原代細(xì)胞制備;

產(chǎn)品性質(zhì)

1)EC NO:3.4.24.3

2)CAS NO:9001-12-1

3)酶活力單位定義:在37℃,pH7.5條件下,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生多肽相當(dāng)于1μmol亮氨酸所需的酶量定義為1個(gè)活力單位。(One Unit releases one micromole of L-leucine equivalents from collagen in 5 hours at 37°C, pH 7.5.)

保存與運(yùn)輸方法

保存:2-8℃干燥保存,2年有效。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。

使用方法

一、儲(chǔ)存液制備

1)直接往100mg膠原酶內(nèi)加入100μl含鈣鎂的HBSS緩沖液,輕輕漩渦震蕩確保完全溶解混勻。

2)根據(jù)具體批次的酶活力,用含鈣鎂的HBSS緩沖液調(diào)整酶濃度到100U/μl(1000×儲(chǔ)存液),之后用低蛋白吸附濾膜過(guò)濾除菌。

3)立即使用或?qū)?chǔ)存液根據(jù)單次用量分裝,置于-20℃避光保存。

4)使用前置于冰上融化,避免反復(fù)凍融。建議膠原酶的工作濃度范圍50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具體使用濃度請(qǐng)根據(jù)具體消化對(duì)象或參考文獻(xiàn)來(lái)調(diào)整。

二、組織分離

1)用無(wú)菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm小片,之后用含鈣鎂的HBSS緩沖液清洗組織片幾次;

2)加足量含鈣鎂的HBSS緩沖液浸沒(méi)組織片,之后按照50-200U/ml用量加入適量膠原酶;

3)37℃孵育4-18h,置于水平搖床并且孵育體系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4)將消化好的細(xì)胞混合物用無(wú)菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過(guò)篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。

5)將過(guò)篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。

6)低速離心,吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動(dòng)法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測(cè)。

三、器官灌注

1)將膠原酶加入37℃預(yù)熱含鈣鎂的HBSS緩沖液,使其濃度為50-200U/ml,或根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2)按照針對(duì)特定器官的預(yù)優(yōu)化頻率來(lái)進(jìn)行灌注;

3)將收集到的細(xì)胞/組織混合碎片用無(wú)菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過(guò)篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。

4)將過(guò)篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。

5)低速離心,吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動(dòng)法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

1:

膠原酶類(lèi)型

組分特征和應(yīng)用

I型膠原酶(Type 1)

相對(duì)均量的多種酶活(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性);

通常用作上皮組織、肝、肺、脂肪和腎上腺組織的原代細(xì)胞制備。

II型膠原酶(Type 2)

含更高的梭菌蛋白酶活性;通常用作心臟、骨、肝、胸腺、唾液腺和軟骨等組織的原代細(xì)胞制備。

III型膠原酶(Type 3)

含較低的次級(jí)蛋白酶水解活性;常用于乳腺組織的原代細(xì)胞制備;

IV型膠原酶(Type 4)

含較低的胰酶活性;通常用于胰島細(xì)胞制備,和維持受體完整性比較重要的其他研究。也可用于髓系細(xì)胞制備。

V型膠原酶(Type 5)

部分純化型,含更高的膠原酶和酪蛋白活性,更低胰酶水平以降低對(duì)膜蛋白和受體造成損傷。適用于胰島制備。

膠原酶NB(標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別)

相對(duì)均量的多種酶活(包括膠原酶、梭菌蛋白酶、中性蛋白酶活性),作用溫和。廣譜適用人和動(dòng)物組織各種細(xì)胞的分離,可用作脂肪組織、軟骨、皮膚、胎盤(pán)、臍帶組織和肺的原代細(xì)胞制備;也適用細(xì)胞傳代,比如胚胎干細(xì)胞。

相關(guān)產(chǎn)品:

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

價(jià)格

J1231

Collagenase I 膠原酶I

5×100mg

1260

J1331

Collagenase II 膠原酶II

5×100mg

1260

J1451

Collagenase IV膠原酶IV

100mg

280

J1621

Dispase II 分散酶

100mg

580

J1742

Hyaluronidase 透明質(zhì)酸酶

1g

1250

J1711

Collagenase V膠原酶V

100mg

520


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