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產品信息

產品簡介

一種遠紅熒光染料（吸收波長 / 發(fā)射波長約為  640/662 nm ），用于對活細胞線粒體進行染色，并且該染料的積累取決于膜電位。   乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。

使用方法

1 儲存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細胞培養(yǎng)級別的無水 DMSO ， 將其充分溶解至終濃度 1 mM 。

本品 M. Wt.= 543.58 g/mol ，換算下來， 50 μg 粉末只需加入 92 μL DMSO 即可得到 1 mM 儲存液。可根據單次的使用量將儲存液分裝后放到 -20 ℃避光，避免反復凍融。

2 工作液的配制

根據不同的實驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據細胞類型和其他的相關因素如細胞或組織的透化等進行適當調整。

用適當的緩沖液或者細胞培養(yǎng)基稀釋 1 mM 儲存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為 25-500  nM 。對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本，推薦工作濃度為 100-500 nM ，為了降低過度加載導致的潛在偽影和線粒體毒性，在不影響實驗結果的前提下應盡可能低濃度染色。另外，濃度過高也可能對其他細胞結構進行染色。

3 染色及檢測

1 ）貼壁細胞的染色

培養(yǎng)皿 / 板內加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進行爬片培養(yǎng)。當細胞長至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入 37 ℃預熱的染色工作液。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育 15-45 min （最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標儀下讀數?；蛘哌M行后續(xù)的固定和透化步驟，見步驟 4 。

2 ）懸浮細胞的染色

離心收集細胞，吸除上清，利用 37 ℃預熱的染色工作液輕輕重懸細胞。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育 15-45 min （最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，離心收集細胞，利用 37 ℃預熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細胞，被染色的細胞可用流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡進行分析。

如果需要蓋玻片上固定化的細胞，那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸（ poly-D-lysine ）包被載玻片或蓋玻片。

或者進行后續(xù)的固定和透化步驟，見步驟 4 。

4 固定和透化

1 ）染色結束后，利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細胞；

2 ）小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預熱的含 2-4% 甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進行細胞固定。

3 ）清洗細胞：吸除固定液，用適當緩沖液沖洗細胞數次。

4 ）細胞透化（可選）：

像 ICC 等實驗需要細胞要做透化，則可將已固定的細胞直接加入含有去污劑如 Triton X-100 的緩沖液中孵育。透化結束后，用緩沖液清洗細胞即可進行后續(xù) ICC 實驗。經檢測，利用含 0.2% Triton X-100 的 PBS 孵育內皮細胞 10min 可以達到良好的透化效果。

另外，還可利用預冷的丙酮透化 5 min ，之后用 PBS 清洗細胞。經驗證，即使后繼沒有進一步的抗體標記，丙酮透化處理也可降低背景信號。

注意事項

1 ） DMSO 有毒，使用時請小心操作。

2 ）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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