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Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅(紅色)
貨號 | S3513 | 售價(元) | 3080 |
規(guī)格 | 1mg | CAS號 | 148504-34-1 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
貨號
名稱
規(guī)格
價格(元)
S3513
Calcein
Red, AM 鈣黃綠素紅(紅色)
1mg
3080
產(chǎn)品簡介:
Calcein, AM,中文名鈣黃綠素乙酰甲酯,CAS NO:148504-34-1,一種具細(xì)胞膜滲透性zui受歡迎的活細(xì)胞熒光染料,用來標(biāo)記和監(jiān)測活細(xì)胞功能,呈綠色熒光(Ex/Em= 490nm/515nm)。然而,Calcein, AM單一顏色使其不能將其用在多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn),比如,其無法和GFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞聯(lián)合使用,因光譜一致。為了解決這一應(yīng)用缺陷,我司特別開發(fā)出Calcein Red, AM,實(shí)現(xiàn)聯(lián)合Calcein, AM對活細(xì)胞的標(biāo)記和功能分析。
同樣原理,Calcein Red, AM自身無熒光,具有細(xì)胞膜滲透性。一旦進(jìn)入細(xì)胞后,被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解為鈣黃綠素紅(Calcein Red),能與胞內(nèi)鈣離子結(jié)合,產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光(Ex/Em=560/574),用標(biāo)準(zhǔn)的TRITC/Cy3濾片設(shè)置檢測。
產(chǎn)品性質(zhì)
同義名:Calcein Red Acetoxymethyl ester 鈣黃綠素紅乙酰甲酯;
分子量:1015.79
純度:≥90%(HPLC)
Ex/Em:560/574nm
溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
注意事項(xiàng)
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請?jiān)诟稍锏沫h(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。
Calcein Red AM對濕度非常敏感,粉末保存一定要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存,且必須緊緊密封蓋子,干燥保存。Calcein Red AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
A、儲存液制備
儲存液配制范圍可為1~5 mM,具體根據(jù)工作濃度來決定,建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工作液為5μM,那么可配制5mM的儲存液,即往1mg Calcein Red AM(Mw:1015.79)內(nèi)加入196μl細(xì)胞培養(yǎng)級別的DMSO即可。儲存液需要根據(jù)單次用量分裝,-20℃避光干燥保存,一定要避免受潮,此種情況下可穩(wěn)定保存數(shù)月.
B、20% Pluronic F-127制備
稱取100mg Pluronic F-127粉末(貨號:S1163)中加入500μl DMSO,配制成20%(w) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存,不用冷藏。如有結(jié)晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。
C、染色步驟
大多數(shù)實(shí)驗(yàn)體系中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。由于不同細(xì)胞系的最佳染色條件不同,初次實(shí)驗(yàn)建議做梯度實(shí)驗(yàn),以確定Calcein Red AM的最佳工作濃度,以最低的探針濃度得到最好的熒光結(jié)果為篩選原則。
【注意】:有時可添加一定量的非離子表面活性劑如Pluronic F127到Calcein Red AM儲存液內(nèi)來增強(qiáng)其水溶性。制備染色工作液前,取一管Calcein Red AM儲存液內(nèi)加入等體積的20% Pluronic F127,使Pluronic F127的終濃度為0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可長期保存,需現(xiàn)配現(xiàn)用。
2. 對于貼壁細(xì)胞,先用胰酶-EDTA消化細(xì)胞,離心收集細(xì)胞(1000 rpm,3min)。對于懸浮細(xì)胞,直接離心收集細(xì)胞。
3. 去上清,用PBS(或者其他緩沖液)清洗細(xì)胞2~3次,以充分去除殘留的酯酶活性。
4. 用1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細(xì)胞,37℃孵育20min~1h。
【注意】:1)若細(xì)胞自身含有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體,需加入丙磺舒(1-2.5mM)或者苯磺唑酮(0.1-0.25mM)到孵育體系內(nèi)以降低去酯化的Calcein Red泄露到胞外;2)降低探針加載溫度,可能會減少探針區(qū)室化現(xiàn)象。
6. 用PBS(或者其他緩沖液)洗滌細(xì)胞兩次去除多余染料。
【注意】:如有必要,使用含有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的緩沖液來進(jìn)行細(xì)胞清洗;
7. 用含合適濾光片(Ex/Em= 560nm/574nm)的儀器進(jìn)行檢測。
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