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  產(chǎn)品介紹

Hoechst 33258，也稱為bisBenzimide H 33258（雙苯酰亞胺H33258），是一種通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA檢測(cè)的藍(lán)色熒光探針。Hoechst 33258可用于活細(xì)胞或固定細(xì)胞，也適用于流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞周期的分析和DNA濃縮的監(jiān)測(cè)。雖然Hoechst 33258比其他衍生物（如Hoechst 33342）的細(xì)胞膜滲透性差些，但其能通過繪制發(fā)射光強(qiáng)度與DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線（a standard emission-to-content curve）來定量測(cè)量DNA含量。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長是346nm，最大發(fā)射波長為460nm；與雙鏈DNA結(jié)合后的最大激發(fā)波長為352nm，最大發(fā)射波長為461nm。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可達(dá)10mg/ml。用于細(xì)胞核染色，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。

   產(chǎn)品性質(zhì)

1） CAS NO：23491-45-4

2） 英文同義名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5′-bi-1H-benzimidazol]-2′-yl]-phenol.trihydrochloride;

bisBenzimide H 33258trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72;NSC33407;

3） 中文同義名：雙苯酰亞胺H 33258三鹽酸鹽；赫斯特?zé)晒馊玖?3258；煙酸己可堿三鹽酸鹽；

甲嗪雙苯咪酚三鹽酸鹽；

4） 分子式：C25H24N6O · 3HCl

5） 分子量：533.88

6） 純度：≥95%

7） 外觀：黃色至深黃色粉末

8） 溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9） Ex/Em：346/460 nm；352/461 nm（Hoechst 33258-DNA）；

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

儲(chǔ)存液配制

用雙蒸水溶解，溶解度高達(dá)10mg/ml，根據(jù)實(shí)際情況配制所需濃度的儲(chǔ)存液如5mg/ml。儲(chǔ)存液2-8oC避光保存，至少1個(gè)月有效?！咀⒁狻浚罕酒酚昧姿猁}緩沖液溶解會(huì)出現(xiàn)沉淀。

使用方法

1. 工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的細(xì)胞或組織染色

對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。Hoechst 33258染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行Hoechst 33258染色。

2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=352/461nm。

3. 活的細(xì)胞或組織染色

3.1 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。對(duì)于六孔板，一個(gè)孔通常需加入1ml染色液；對(duì)于96孔板，一個(gè)孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20min。

3.3 用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

3.4 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=352/461nm。

注意事項(xiàng)

1）Hoechst 33258對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2）熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液（Fluoromount-GTM抗熒光淬滅封片劑（水溶性））。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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