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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

? ? ? ?本試劑盒在磁珠捕獲法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良優(yōu)化，添加了CD9/CD81/CD63?三種磁珠可特異性捕獲EVs表面的標(biāo)志性蛋白。以CD9磁珠為例，EVlent中的功能化磁珠可以高效地將EVs捕獲到裝配了EVs特征蛋白CD9抗體的修飾珠上，這些磁珠對(duì)EVs表面的CD9蛋白具有獨(dú)特親和性；可滿足多種下游實(shí)驗(yàn)需求，如外泌體-細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、蛋白組學(xué)研究、NGS高通量測(cè)序和WB檢測(cè)等。

產(chǎn)品組分及儲(chǔ)存條件

操作流程

1.?血漿樣本離心(2000?g、5-10min)取上清備用，-80?℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。

2.?取200?μL血漿，加入800?μL預(yù)冷Incubation buffer Ⅰ，室溫混勻。

3.?加入40 μL EVlent magnetic beads，室溫?fù)u勻孵育2-3 h。

4.?用磁力架磁吸3 min，分離棄去上清，再加入1 mL Incubation buffer Ⅱ，上下顛倒搖勻20次，磁吸分離棄去上清。

5.?加入1?mL Washing Buffer，上下顛倒搖勻20次，磁吸3?min分離棄去上清。重復(fù)該步驟2次。

以下步驟需根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)需求，選擇相應(yīng)的操作方法：

若下游為蛋白組學(xué)研究（優(yōu)先推薦）

a.?將步驟5得到的beads，加入50 μL?Lysis buffer ；

b.?按照實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的組學(xué)前處理步驟處理即可，或者選用組學(xué)前處理試劑盒（YW006）進(jìn)行處理快速且高效。

若下游為WB表征研究

a.?將步驟5得到的beads，加入4×LDS 上樣緩沖液（B0007, Invitrogen）；

b.?95℃煮5?min后，磁性分離后，吸取上清進(jìn)行PAGE膠上樣。

若下游為NTA和TEM檢測(cè)

a.?加入100 μL?Elution Buffer，渦旋震蕩10 min后，磁吸3?min收集上清。

b.?再次加入100 μL?Elution Buffer，渦旋震蕩10 min后，磁吸3 min收集合并上清。

備注：若下游為NTA/TEM檢測(cè)則需酌情增加血漿樣本量，建議500?μL效果更佳。

注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明

? ? ? ?1.磁珠靜置后會(huì)沉淀，每次使用磁珠前請(qǐng)溫和、充分的震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。

? ? ? ?2.Elution Buffer有刺激性氣味，請(qǐng)盡量在通風(fēng)櫥內(nèi)使用。

? ? ? ?3.磁珠保存及使用過(guò)程中應(yīng)避免冷凍、干燥和高速離心等操作，否則會(huì)破壞磁珠結(jié)構(gòu)，影響蛋白結(jié)合能力。

? ? ? ?4.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

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