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Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 紅色熒光標記人源低密度脂蛋白
貨號 | H8696 | 售價(元) | 2728 |
規(guī)格 | 500μg | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品信息:
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
價格 |
H8696 |
Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 紅色熒光標記人源低密度脂蛋白 |
500μg |
2728元 |
產(chǎn)品簡介
低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,簡稱為LDL)是通過脂蛋白酯酶的水解作用,脫去極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三脂,釋放游離脂肪酸轉(zhuǎn)化而來的。因甘油三酯的去除使得膽固醇所占比例提高,增加顆粒本身密度,從而得到LDL。LDL與脊椎細胞表面的受體特異性結(jié)合,然后通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將膽固醇運輸?shù)饺砀魈幖毎?。因此?span>LDL可以用來研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過程,尤其是在動脈粥樣硬化等疾病中,血漿來源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。
紅色熒光標記人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是標記熒光探針Dil(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用來觀察培養(yǎng)細胞的LDL結(jié)合位點,或篩選LDL受體表達缺陷型細胞突變株。也可以通過流式細胞術(shù)評估細胞受體水平,或檢測組織內(nèi)的受體水平。 DiI-LDL是研究細胞內(nèi)吞作用非常好的標記物。
warbio提供的Human DiI-LDL為無菌包裝,可以直接稀釋使用。除提供DiI-LDL,我們還提供不帶標記的LDL,以及修飾化的LDL如乙?;?span>LDL(Ac-LDL),以及氧化修飾的LDL(Ox-LDL)。
產(chǎn)品屬性
濃度:0.8-3.0 mg/ml
外觀:乳狀液體
吸光度比例:Dil/Protein=555nm/275nm=1.30
緩沖液組分:0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
運輸與保存方法:冰袋運輸;4℃無菌,建議避光,收到貨后穩(wěn)定保存6周。切忌凍存!
制備與操作方法
純化的人健康血漿來源的LDL直接標記上DiI熒光探針,然后通過超速離心以及透析的方法純化回收標記產(chǎn)物,并濾膜過濾除菌。純化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。
操作步驟
a) 無菌條件下,將DiI-LDL用細胞培養(yǎng)基稀釋至25-50 μg/ml。
b) 加入活細胞內(nèi),37℃培養(yǎng)4-5小時。
c) 孵育結(jié)束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養(yǎng)基,并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。
d) 根據(jù)實驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
1) 熒光顯微鏡觀察
采用標準的羅丹明激發(fā):發(fā)射濾光片(或建議使用波長為:Ex/Em=549nm/565nm);若需要請使用含3%甲醛的PBS進行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有機溶劑。注:需設(shè)陽性細胞以做對照。
2)細胞分選(流式細胞術(shù))
胰蛋白酶處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液,選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽性對照,從而進行流式分選設(shè)門(gate)。(建議使用波長為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。
注意事項
本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定,建議即配即用;
長期貯存可能會有沉淀析出,屬于正?,F(xiàn)象,低速離心2 min去除沉淀即可使用;
LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與,過量EDTA的存在會抑制其結(jié)合;
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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