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Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

貨號 TG221 售價(元) 1591.25
規(guī)格 5×50μg CAS號 112926-02-0
  • 產(chǎn)品簡介
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貨號

名稱

規(guī)格

價格

TG201

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

50μg

399

TG221

Indo-1, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

5×50μg

1591.25

產(chǎn)品介紹

Indo-1是一種細胞生物學常用的鈣離子熒光探針,與Fura-2為目前使用最廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑,Indo-1能特異性地結合Ca2+,同時可發(fā)出熒光,結合Ca2+后的最大發(fā)射波長從結合前的475nm向400nm(Ca2+飽和時)偏移,該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉:在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長激發(fā)該探針,在400nm和475nm的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號,通過二者熒光強度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物,無法進入細胞內(nèi),為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯,使其成為Indo-1/AM,該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷,極大的提高了細胞滲透性。在細胞內(nèi),Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結合。

 產(chǎn)品性質(zhì)

CAS號(CAS NO.):112926-02-0

分子式(Formula):C47H51N3O22

分子量(Molecular Weight):1009.91

Ex/Em:346nm/475nm

溶解性(Solubility):溶于DMSO

存儲條件:-20 ℃避光保存。

使用說明:

1)Indo-1/AM儲存液的配制

利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的儲存液,該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回溫至室溫。

【注】: ① 因為Indo-1/AM在水中的溶解性和穩(wěn)定性較差,不可用水溶性緩沖液配制Indo-1/AM儲存液。

② 溶解用的DMSO需要保證新鮮無水,否則將會導致AM 體水解,使熒光染料無法進入細胞,影響實驗效果。

2)Indo-1/AM工作液的配制

利用合適緩沖液(如Hanks & Hepes )將Indo-1/AM稀釋成1-10μM的工作液,具體稀釋方法如1 mM母液配制1 ml濃度為4 μM工作液,用1 ml 緩沖液稀釋4 μl 1mM母液即可,混勻。

【注】: ① 典型工作液濃度為0.1-5μM,對于大多數(shù)細胞,我們推薦加載濃度4-5μM,具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

② Indo-1/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復凍存。

3)(可選)如果Indo-1/AM進入細胞的效果不好,可向 Indo-1/AM/DMSO 儲存液中加入適量20% Pluronic F127溶液,最終稀釋至其終濃度為0.02-0.05%,Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞。

【注】:Pluronic F127可降低Indo-1/AM的穩(wěn)定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議將其加入儲存液長期保存。

4)取出預培養(yǎng)的細胞,除去培養(yǎng)基,使用緩沖液洗滌細胞3次。

【注】:如果使用含血清的培養(yǎng)基,血清中的酯酶會分解 AM 體,從而降低Indo-1/AM進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高,所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。

5)將 Indo-1/AM工作液加入細胞,加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養(yǎng)15-60min,然后除去Indo-1/AM工作液。

【注】:關于孵育的時間,如果首次做實驗不能確定,建議先孵育30min,看熒光效果:如果細胞死亡較多,適當縮短時間;如果熒光強度太弱,適當延長時間。

6)用不含探針緩沖液洗滌細胞 3 次,以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細胞。

7)37℃培養(yǎng)箱孵育約 20-30min,以確保 AM 體在細胞內(nèi)的完全去酯化作用。

8)流式細胞儀檢測細胞。

【注】: ① 某些細胞會將熒光探針被動運輸或分泌到胞外,在一些通過陰離子泵泄漏探針的細胞內(nèi)該現(xiàn)象尤其嚴重,此時需加入一些抑制劑防止該情況的發(fā)生,如加入適量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意,抑制劑的加入量必須經(jīng)過優(yōu)化,過量的抑制劑也會對細胞造成不利影響。

② 某些細胞具有自體熒光會影響結果分析,需使用未加載探針細胞做對照,在結果分析時在同一波長下扣除自熒光。

      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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