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SpCas9 CRISPR酶
| 貨號 | 32101-01/32101-03 | 售價（元） | 600/2600 |
| 規(guī)格 | 100 pmoL/1000 pmoL | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
價格 |
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32101-01 |
SpCas9 |
100 pmoL |
600 |
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32101-03 |
SpCas9 |
1,000 pmoL |
2600 |
產(chǎn)品簡介
SpCas9 來源于 S. pyogenes 菌株，是依賴于 crRNA 和 tracrRNA(或連接后形成的 sgRNA)引導的 DNA內(nèi)切核酸酶，在靶標雙鏈 DNA 存在 PAM(NGG)的情況下，特異地剪切靶標雙鏈 DNA，使 DNA 雙鏈斷裂并生成平末端。PAM 對于 Cas9 的識別和剪切都是必需的，其剪切位點位于目標序列(target sequence)內(nèi)，離 PAM 區(qū) 3 個堿基。此外，在 PAMmer 序列存在時，SpCas9 也能特異地剪切單鏈 DNA 或 RNA(詳細信息請參考 PMID: 24476820；PMID: 25274302)。此酶還可應用于體外靶標 DNA 的剪切、目的片段的克隆等實驗(詳細信息可參考 PMID: 26323354) 。
產(chǎn)品組分
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組分 |
32101-01 (100 pmol) |
32101-03 (1,000 pmol) |
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SpCas9 Nuclease (10 μM)a |
100 pmol |
1,000 pmol |
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10 × TOLO Buffer 3 |
1 mL |
1 mL |
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Control Target DNA and sgRNAb |
5 μL |
5 μL |
a. SpCas9 Nuclease 濃度為 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 規(guī)格的總體積為 10 μL，1,000 pmol 規(guī)格的總體積為 100 μL；
b. Control Target DNA and sgRNA 應保存于-80℃并避免反復凍融，必須在 6 個月內(nèi)使用，使用時建議取 0.5 μL 至每 20 μL 反應體系。 n
保存條件
Control Target DNA and sgRNA 于-80℃儲存，其余組分-20℃儲存；≤ 0℃運輸。 n
實驗流程
1. 順式剪切實驗
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × TOLO Buffer 3 |
2 μL |
1 × |
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10 μM SpCas9 Nuclease |
0.5 μL |
250 nM |
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10 μM sgRNA |
0.5 μL |
250 nM |
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1 μM Target dsDNAc |
0.5 μL |
25 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
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*若用核酸電泳來分析順式剪切產(chǎn)物，對于 20 μL 順式剪切應體系，推薦 target DNA的使用量為 100 ng～500 ng，且 target DNA片段長度在 300 bp～3 kb 范圍內(nèi)。不同長度 target DNA 需要的 Cas 酶和 sgRNA 的量需要根據(jù) target DNA 的摩爾量計算，建議保持 Cas 酶:sgRNA:target DNA的摩爾比為 10:10:1，以盡量確保 target DNA被剪切完全。
37℃反應 30 min~1 h，85℃滅活 5 min。核酸電泳分析順式剪切產(chǎn)物。
實驗結(jié)果
注意事項
1. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。
2. 因反應需添加 RNA(sgRNA 或者 crRNA:tracrRNA)，整個體系，包括 Cas9 酶都必需不含任何 RNase 活性。本產(chǎn)品經(jīng)過嚴格質(zhì)控，無任何其它核酸酶污染。
3. Cas9 酶對熱敏感，容易失活，應全程冰上配置反應體系，使用后立即置于-20℃保存。
4. Cas9 酶與 DNA、sgRNA 形成復合物會影響電泳，需 85℃高溫失活 Cas9 酶后電泳檢測。
5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。
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