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過氧化物酶（POD）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0008 | 售價（元） | 216 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0008 |
過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0008-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
25ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
100μl |
4℃ |
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試劑三：液體 |
100μl |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照2.6（ml）：1.5（μl）：1（μl）的比例混勻；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預(yù)熱10min以上；現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本和190μl工作液，混勻，記錄470nm下1min時吸光值A1和2min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
注意：
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
POD活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
計算公式：
POD（U/ml）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =2000×ΔA
2、組織、細菌或細胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =4×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml； V樣：加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/ml）=ΔA×V反總÷V樣÷0.005÷T =4000×ΔA
2、組織、細菌或細胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每ml反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =8×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml； V樣：加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。