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黃嘌呤氧化酶（XOD）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0026 | 售價（元） | 576 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0026 |
黃嘌呤氧化酶（XOD）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時，XOD大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理：
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0026-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
30ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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需自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至290nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 XOD檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入15ml試劑一，充分混勻，待用；現(xiàn)配現(xiàn)用；
3、 測定前將XOD檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板）。
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μl樣本和250μl工作液，立即混勻并計時，記錄290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
XOD活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=2131×ΔA
2、組織、細菌或細胞中XOD計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=2131×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=4.26×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下的回歸曲線為y = 1.2396x + 0.0259，R2 = 0.9977；其中y為△A，x為NADPH濃度nmol/ml
1、血清（漿）中NADPH含量計算
NADPH含量(nmol/ml）= [(△A -0.0259）÷1.2396×V1)] ÷(V3×V1÷V2)= 16.1× (△A -0.0259）
2、組織、細菌或細胞中NADPH含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADPH (nmol/mg prot）=[ (△A -0.0259）÷1.2396×V1)] ÷(V1×Cpr)= 0.8× (△A -0.0259）÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
NADPH (nmol/g 鮮重）=[(△A -0.0259）÷1.2396×V1) ]÷(W×V1÷V2)=1.6× (△A -0.0259）÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
NADPH (nmol/104 cell）=[(△A -0.0259）÷1.2396×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.003× (△A -0.0259）
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，2ml；V3：加入血清（漿）體積：0.1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。