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葡萄糖氧化酶（GOD）檢測試劑盒（分光光度法 50T/24S）
| 貨號 | SH0035 | 售價（元） | 564 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0035 |
葡萄糖氧化酶（GOD）檢測試劑盒（分光光度法 50T/24S） |
50管/24樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生H2O2，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一
測定原理：
GOD催化產(chǎn)生H2O2，過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在500 nm有特征吸收峰，顏色深淺與GOD活性成線性關(guān)系。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0035-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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緩沖液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入20ml緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入20ml緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
樣品測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一和試劑二的配制：參見試劑的組成和配制。
3、煮沸樣本的準(zhǔn)備：取500μl樣本至新的EP管中，95℃水浴10min，冷卻至室溫后，8000g 4℃離心10min，取上清作為對照管的煮沸樣本待測。
4、測定操作表
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試劑（μl） |
對照管 |
測定管 |
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樣本 |
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250 |
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煮沸樣本 |
250 |
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試劑一 |
375 |
375 |
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試劑二 |
375 |
375 |
混勻，35'C保溫15min后，于500nm波長處讀取吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。
GOD活力單位的計算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169；x為H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y為ΔA。
1、血清（漿）GOD活力的計算
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/ml）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織GOD活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/g鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.625ml； V樣：加入樣本體積，0.25ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
NADPH (nmol/104 cell）=[(△A -0.0259）÷1.2396×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.003× (△A -0.0259）
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，2ml；V3：加入血清（漿）體積：0.1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。