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總巰基測(cè)定試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號(hào) | SH0058 | 售價(jià)（元） | 264 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0058 |
總巰基測(cè)定試劑盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)，而且參與活性氧清除，后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。
測(cè)定原理：
巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0058-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
18ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1ml |
4℃避光 |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板、乙醇和蒸餾水。
樣品的制備：
1. 按照組織質(zhì)量（g）：水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 血清，培養(yǎng)液：稀釋5倍后測(cè)定，可取0.1ml樣本，加入0.4ml蒸餾水，混勻，置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm。
2、 操作表
在96孔板中加入如下試劑
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
40 |
40 |
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試劑一（μl） |
150 |
150 |
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試劑二（μl） |
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10 |
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乙醇（μl） |
10 |
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混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm吸光值。ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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計(jì)算公式：
總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x為標(biāo)品濃度，單位μmol/ml，y為吸光度ΔA。
1. 組織：
（1）按樣本重量計(jì)算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液：
總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養(yǎng)液等液體樣本稀釋倍數(shù)；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事項(xiàng)：
最低檢出限為10μmol/L。
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