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NAD激酶（NADK）檢測試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號 | SH0096 | 售價（元） | 1440 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0096 |
NAD激酶（NADK）檢測試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷?；w進行磷酸化反應(yīng)，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測定原理：
NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；在340 nm下測定NADPH增加速率。可反映出NADK活性的大小。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0096-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
25 ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
樣本測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑一和試劑二37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min以上。
3、工作液Ⅰ的配制：在試劑三中加入5ml試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
工作液Ⅱ的配制：在試劑四中加入18ml試劑二，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
4、加樣表
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試劑名稱(μl) |
測定孔 |
對照管 |
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樣本 |
20 |
20 |
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工作液Ⅰ |
80 |
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試劑一 |
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80 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min，立即煮沸
2min（蓋緊，防止水分散失）冰浴冷卻，10000g，25℃離心10min，取上清
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上清液 |
40 |
40 |
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工作液Ⅱ |
160 |
160 |
加完試劑混勻，室溫靜置15min，340nm下測定吸光值，ΔA=A測定-A對照。
NADK活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADK活力的計算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=53.59×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NADK活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=53.59×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.107×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，15 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADK活力的計算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=107.18×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NADK活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=107.18×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=107.18×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADP定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.214×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，15 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。