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甲醛脫氫酶(FDH)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

貨號(hào) SH0101 售價(jià)(元) 636
規(guī)格 50T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0101

甲醛脫氫酶(FDH)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物,對(duì)所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶(ADH)的家庭成員之一,廣泛存在于原核和真核生物中,該酶能利用NAD+作為輔酶,將有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。

測(cè)定原理:

甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH,在340nm處的吸光值會(huì)增加,測(cè)定340nm處的吸光值變化,可計(jì)算得到甲醛脫氫酶的活性。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0101-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

30ml

4℃

試劑二:粉劑

1

-20

試劑三:粉劑

1

4℃

試劑:液體

3ml

4℃避光

說(shuō)明書(shū)

一份

 

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入15ml水溶解待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入3ml水溶解待用。

自備儀器和用品:

天平、離心機(jī)、分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

FDH提取:

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3. 液體:直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表

在比色皿中加入如下試劑

 

測(cè)定管

樣本(μl

100

試劑一(μl

550

試劑二(μl

250

試劑三(μl

50

試劑四(μl

50

混勻,于340nm下測(cè)定初始吸光值A15min后的吸光值A2,△A=A2-A1。

若樣本數(shù)量較多,可將試劑按比例配成工作液使用。

FDH酶活計(jì)算:

1)按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

FDH酶活(nmol/min/mg prot= ×V反總÷V×Cpr÷T = 322×△A÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

FDH酶活(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷V×W÷V樣總)÷T =322×△A÷W

3)按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

FDH酶活(nmol/min/104cell= ×V反總÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè)))÷T= 322×△A÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

酶活定義:每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

FDH酶活(nmol/min/ml= ×V反總÷V÷T=322×△A

NADH微摩爾消光系數(shù),6.22×10-3 L/μmol/cmd:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1ml;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1ml;V樣總:加入提取液體積,1mlT,反應(yīng)時(shí)間,5min;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g

 

 

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