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線粒體分離和提取檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

貨號(hào) SH0266 售價(jià)(元) 342
規(guī)格 50T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0266

線粒體分離和提取檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

線粒體是半自主性細(xì)胞器,不僅是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷ATP)的主要場(chǎng)所,為細(xì)胞的活動(dòng)提供能量,而且在許多生命活動(dòng)中具有重要調(diào)控作用。因此,準(zhǔn)確和全面分離保持正?;钚缘木€粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。

測(cè)定原理:

利用專門試劑溫和勻漿組織和細(xì)胞,再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體;利用專門試劑,配合超聲波破碎線粒體,可以得到保持活性的線粒體酶。

試劑的組成和配制:

產(chǎn)品名稱

SH0266-50T/48S

Storage

試劑一:液體

50ml

-20

試劑二:液體

10ml

-20

試劑三:液體

10ml

-20

試劑:液體

1ml

-20

說明書

一份

需自備的儀器和用品:

超聲波破碎儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

提取步驟:

1、準(zhǔn)確稱取約0.1g組織或收集約500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑四,用冰浴勻漿器或研缽研磨。

2、4 ℃ 600 g離心5min。

3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心10min。

4、上清液即胞漿提取物,可用于研究線粒體蛋白向胞漿的釋放。

5、沉淀為完整線粒體。含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線粒體的生理功能。可用于線粒體的生理功能等方面的研究。

6、在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),可用于線粒體酶活性測(cè)定。

7、在沉淀中加入200uL試劑三和2uL 試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),可用于線粒體蛋白濃度測(cè)定。

注意事項(xiàng)

1、 分離線粒體和提取線粒體蛋白質(zhì)的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行,所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷。

2、 通常在分離線粒體時(shí)前后兩次離心速度選取600g11,000g,如果希望純度更高,但對(duì)線粒體的得率要求不高,前后兩次離心速度可以采用1000g3500g。

3、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 


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