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β-淀粉酶(β--AL)檢測試劑盒 (分光光度50T/24S)

貨號 SH0283 售價(元) 576
規(guī)格 50T/24S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0283

β-淀粉酶(β--AL)檢測試劑盒 (分光光度50T/24S)

50T/24S

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                           

測定意義:

淀粉酶負責水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。

測定原理:

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測出另一種淀粉酶的活力。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0283-50T/24S

Storage

試劑一:液體

50ml

RT

試劑二:液體

40ml

4

說明書

1

 

試劑一:50ml×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;

試劑二:40ml×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加熱后再用。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、離心機、可調式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

粗酶液制備:

組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加入1ml蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提??;3000g,25℃離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10 ml,搖勻,即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液1ml,加入4ml蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測定。

血清(漿)等液體樣本:1)直接檢測α-淀粉酶。(2)吸取淀粉酶原液1ml,加入4ml蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測定。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調零。

2、試劑一和試劑二40℃預熱10min。

3、測定操作表:

 

試劑名稱(μl

α淀粉酶活力測定

總淀粉酶活力測定

對照管

測定管

對照管

測定管

淀粉酶原液

250

250

 

 

70℃水浴15min左右,冷卻

淀粉酶稀釋液

 

 

250

250

蒸餾水

250

 

250

 

試劑二

 

250

 

250

在40℃恒溫水浴中準確保溫5min

試劑一

500

500

500

500

混勻,95℃水浴5min,冷卻,在540nm下測定吸光度,從左到右分別記為A1、A2A3A4。

酶活性計算:

1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標準品濃度(mg/ml),y為吸光值。

2、α淀粉酶活性

1)按照樣本質量計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A10.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.075×(A2-A10.1778)÷W

2)按照蛋白質含量計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A10.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=0.1075×(A2-A10.1778) ÷Cpr

3)血清(漿)等液體樣本中α淀粉酶活性計算

單位定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

α淀粉酶活性(mg/min/ml)= [(A2-A10.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(A2-A10.1778)

3、總淀粉酶活性計算

1)按照樣品質量計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

總淀粉酶活性(mg/min//g鮮重)=5×[(A4-A30.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=5.375×(A4-A30.1778)÷W

2)按照蛋白質含量計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A30.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=0.5375×(A4-A30.1778) ÷Cpr

3)血清(漿)等液體樣本中總淀粉酶活性計算

單位定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

總淀粉酶活性(mg/min/ml) =5×[(A4-A30.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T

=0.5375×(A4-A30.1778)

4、β-淀粉酶活性計算

1)按照樣本質量計算

單位定義:每g組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A30.1778)-1.075×(A2-A10.1778)]÷W

2)按照蛋白質含量計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A30.1778)-0.1075×(A2-A10.1778)]÷Cpr

3)血清(漿)等液體樣本中β-淀粉酶活性計算

單位定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

β-淀粉酶活性(mg/min/ml=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A30.1778)-0.1075×(A2-A10.1778)

5:總淀粉酶稀釋倍數(shù);V反總:反應體系總體積,0.5ml;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.25 ml;V樣總:提取液總體積,10 ml; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g;T:反應時間,5min。

 

 

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