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淀粉脫分支酶檢測(cè)試劑盒（分光光度法 50T/24S）
| 貨號(hào) | SH0289 | 售價(jià)（元） | 1140 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0289 |
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒（分光光度法 50T/24S） |
50管/24樣 |
測(cè)定意義：
DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?/span>-1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。
測(cè)定原理：
采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測(cè)定還原糖含量的變化來計(jì)算DBE活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0289-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
15ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
12ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
35ml |
4℃ |
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說明書 |
1份 |
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試劑二臨用前每支加入6ml試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑4℃保存；
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
粗酶液制備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
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試劑名稱（μl） |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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95℃水浴5min后滅活的樣本 |
200 |
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粗酶液 |
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200 |
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試劑一 |
200 |
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試劑二 |
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200 |
混勻，37℃準(zhǔn)確保溫2h
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試劑三 |
200 |
200 |
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試劑四 |
600 |
600 |
混勻，95℃水浴5min，于1ml玻璃比色皿540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。
注意：可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。
DBE活力單位的計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件測(cè)定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.4ml； V樣：加入樣本體積，0.2ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.1mg/ml-1mg/ml。
ΔA線性范圍為0.01-2。