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淀粉磷酸化酶檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

貨號 SH0291 售價(元) 1680
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0291

淀粉磷酸化酶(Starch phosphorylase,SP)試劑盒(分光光度法 50T/48S)

50管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

淀粉磷酸化酶(Starch PhosphorylaseSP)是淀粉代謝過程唯一的可逆反應酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質(zhì)體中,負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細胞質(zhì)基質(zhì)中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,負責葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過程中的關鍵酶。

在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級,一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH,使340nm下吸光值增加。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0291-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4

試劑一:液體

50ml

4

試劑二:粉劑

1

4

試劑:粉劑

1

4

說明書

 

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入3ml水溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存;

試劑三:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入3ml水溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存。

 

自備儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

 

樣本的前處理:

1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零;

2、工作液的配制:臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照每個樣本850μL:50μL:50μL的比例混合,臨用前配制,半小時內(nèi)使用。

3、1ml石英比色皿中加入50μL樣本和950μL工作液,立即混勻,記錄340nm1min時的吸光值A16min時的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。

SP活力單位的計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SPnmol/min/mgprot=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T

=943×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SPnmol/min/g鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=943×ΔA÷W

(3)按樣本細胞計算

單位定義:每萬個細胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SPnmol/min/104cell=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1.886×ΔA

V反總:反應體系總體積,1×10-3L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;細胞數(shù)量,500萬。

 

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