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肉桂酸-4-羥化酶（ C4H) 檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0418 | 售價（元） | 1980 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0418 |
肉桂酸-4-羥化酶（ C4H) 檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌類中，該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二個關(guān)鍵酶。
測定原理：
C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH，在340nm下測定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0418-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
25ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
細菌或培養(yǎng)細胞：
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）取試劑二一瓶，加入10ml試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用（配好后24h內(nèi)用完）；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本和190μl試劑二，混勻，立即記錄340nm處初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
C4H活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
C4H（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=2.572×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。