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測定意義：

Hephaestin (HP)作為銅藍蛋白的同系物,是近年來發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運蛋白亞鐵氧化酶，HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe²⁺氧化生成Fe³⁺，在介導鐵的跨膜轉(zhuǎn)運中有重要作用。

測定原理：

HP催化Fe²⁺氧化為Fe³⁺，Fe²⁺和ferrozine反應(yīng)顯色，在560 nm下有特征吸光值。通過測定Fe²⁺的減少速率可測得亞鐵氧化酶的活性。

試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：水ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至560 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在玻璃比色皿中加入下列試劑：

混勻，立即測定A對照和A測定，ΔA=A對照-A測定。(每個測定管需設(shè)一個對照管)：

HP活性計算:

標準曲線：y = 16.427x - 0.0006，R² = 0.9998；(x為標準品濃度，μmol/ml；y為吸光值ΔA)

（1）按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g樣本每分鐘氧化1nmol Fe²⁺定義為一個酶活力單位。

HP（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000= 20.29×（△A+0.0006）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘氧化1nmol Fe²⁺定義為一個酶活力單位。

HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V總÷T ÷（Cpr×V樣）× 1000 = 20.29×（△A+0.0006）÷Cpr

V總：反應(yīng)體系體積，0.1 ml；V樣：加入樣本體積0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。