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漆酶檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號(hào) | SH0432 | 售價(jià)（元） | 1140 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0432 |
漆酶（Laccase）試劑盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
測(cè)定意義：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測(cè)定原理：
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測(cè)定ABTS自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0432-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
30ml |
4℃ |
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工作液：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加15ml試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、細(xì)胞培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
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試劑名稱(μl) |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μl） |
45 |
45 |
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試劑一（μl） |
255 |
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工作液（μl） |
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255 |
60℃水浴20min后冷卻至室溫，取200μl反應(yīng)液于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定420nm處吸光值A，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。
注意事項(xiàng)
1、極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會(huì)出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過(guò)8000g 25℃離心10min后，取上清檢測(cè)，例如成熟的水稻葉片樣本。
2、為確保檢測(cè)準(zhǔn)確性，若ΔA大于1，將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測(cè)，計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
酶活性計(jì)算公式：
a．用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= 
×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= 
×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18.52×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 18.52×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= 
×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 18.52×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= 
×V反總÷V樣÷T= 18520×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.045ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min。
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