錳過氧化物酶（Mnp）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0436 | 售價（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0436 |
錳過氧化物酶（Mnp）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
錳過氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，主要存在于擔子菌中，屬于木質素降解酶系，能有效的降解木質素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。
測定原理：
錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。
試劑組成和配制：
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產品名稱 |
SH0436-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
110ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃避光 |
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試劑四：液體 |
2ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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需自備儀器和用品：
天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提取：
1、組織：按照質量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
2、細胞：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3、培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至465nm，蒸餾水調零。
2、測定前將試劑一、二、三、四在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min以上。
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
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樣本 |
20 |
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試劑一 |
100 |
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試劑二 |
20 |
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試劑三 |
40 |
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試劑四 |
20 |
在微量石英比色皿或96孔板中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄465nm下30s時的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
注意事項
若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三、四按比例配成混合液，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測定時加入20μl樣本和180μl混合液測定。
酶活計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2．按照樣本質量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/g 鮮重）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 413×ΔA÷W
3．按照細胞數量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T
= 413×ΔA÷細胞數量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T= 413×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，2×10-4 L；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，2min
b.用96孔板測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr
2．按照樣本質量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/g 鮮重）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 826×ΔA÷W
3．按照細胞數量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T
= 826×ΔA÷細胞數量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T= 826×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數：12100L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應總體積，2×10-4 L；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，2min。