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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0442 | 售價（元） | 1440 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0442 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸，是調(diào)節(jié)糖異生途徑的關鍵酶。
測定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0442-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
18ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
16.5μl |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑四的配制：臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
4、將工作液和試劑四置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱5分鐘。
5、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、10μl試劑四和180μl工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.1可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
PEPCK活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）PEPCK活力計算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/ml））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3215×ΔA
2、組織、細菌或細胞中PEPCK活力計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位定義：每1萬個細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=6.43×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）PEPCK活力計算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/ml））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中PEPCK活力計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位定義：每1萬個細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=12.86×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。