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酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）檢測試劑盒（分光光度法25T/24S）
| 貨號 | SH0460 | 售價(jià)（元） | 2400 |
| 規(guī)格 | 25T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0459 |
?；D(zhuǎn)移酶（AAT）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50T/48S |
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SH0460 |
酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）檢測試劑盒（分光光度法25T/24S） |
25T/24S |
測定意義：
AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0460-25T/24S |
SH0459-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
25ml |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
25ml |
50ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
1支 |
1瓶 |
4℃避光 |
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說明書 |
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一份 |
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自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
SH0460-25T/24S-AAT測定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入22.5mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1.25mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μl提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μl樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管?！?/span>A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
SH0459-50T/48S-AAT測定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入45ml試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇2.5ml充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μl提取液和900μl工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μl試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μl樣本和900μl工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μl試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管。△A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計(jì)算公式：
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（
×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（
×d）×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /ml) = △A ÷（
×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min。