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磷脂酶A2（PLA2）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號(hào) | SH0478 | 售價(jià)（元） | 4560 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0478 |
磷脂酶A2（PLA2）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50T/24S |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂?；饷?，廣泛存在于動(dòng)植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細(xì)胞信號(hào)傳遞、脂質(zhì)過(guò)氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過(guò)程，在控制體內(nèi)磷脂類(lèi)物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝、參與疾病的病理進(jìn)程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。
測(cè)定原理：
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產(chǎn)生游離巰基，與DTNB反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，在412nm處有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0478-50T/24S |
Storage |
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提取液液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5瓶 |
-20℃避光 |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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試劑三：液體×5瓶，-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、超速冷凍離心機(jī)、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3. 血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
100 |
100 |
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試劑二（μl） |
900 |
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試劑三（μl） |
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900 |
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充分混勻，37℃反應(yīng)10min，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定412nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管 |
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計(jì)算公式：
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（
×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 73.53×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；
T：反應(yīng)時(shí)間，10min
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