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脂蛋白酯酶(LPL)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號(hào) SH0482 售價(jià)(元) 516
規(guī)格 50T/24S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0482

脂蛋白酯酶(LPL)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,以供組織氧化供能和貯存,并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。

測(cè)定原理:

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0482-50T/24S

Storage

試劑一:液體

60ml

4℃

試劑二:液體

10ml

4℃避光

試劑三:液體

25ml

4℃

說(shuō)明書(shū)

一份

自備儀器和用品:

天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿。

樣品處理:

1. 組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1ml試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一)加入試劑一,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。

3. 血清:直接測(cè)定。

測(cè)定操作:

 

對(duì)照管

測(cè)定管

樣品(μl

100

100

試劑一(μl

400

 

試劑二(μl

 

400

混勻,45水浴10min

試劑三(μl

500

500

充分混勻,25℃靜置2min,于1ml玻璃比色皿,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定400nm處吸光值,記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,A=A測(cè)定管- A對(duì)照管

計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y= 0.0581x -0.0169,R2=0.9982

1.按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義45,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性(μmol /min/mg prot= △A+0.0169÷ 0.0581×V反總÷V×Cpr÷T

= 17.21×△A+0.0169÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義45,pH7.5條件下,每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性(μmol /min /g 鮮重)=△A+0.0169÷0.0581×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

= 17.21×△A+0.0169÷W

3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義45,pH7.5條件下,104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性(μmol /min /104 cell= △A+0.0169÷0.0581×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

                                        = 17.21×△A+0.0169÷細(xì)胞數(shù)量

4.按照液體體積計(jì)算

酶活性定義45pH7.5條件下,每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性(μmol /min /ml=△A+0.0169÷0.0581×V反總÷V÷T

                                 = 17.21×△A+0.0169

V反總:反應(yīng)總體積,1ml;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.1ml;W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應(yīng)時(shí)間,10min

注意事項(xiàng):

1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測(cè)定,否則影響吸光值。

2. 吸光值過(guò)高或者測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定,則將酶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

 

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