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果膠裂解酶(PL)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號(hào) SH0506 售價(jià)(元) 660
規(guī)格 50T/24S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0506

果膠裂解酶(PL)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,是一種能降解植物細(xì)胞壁,導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶,來(lái)源比較廣泛,主要來(lái)源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的純化,紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理:

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰。

試劑組成和配制

產(chǎn)品名稱

SH0506-50T/24S

Storage

提取液:液體

50ml

4℃

試劑一:液體

15ml

4℃

試劑二:液體

15ml

4℃

試劑三:液體

15ml

4℃

說(shuō)明書

一份

自備儀器和用品:

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1 ml石英比色皿、恒溫水浴鍋

酶液提?。?/span>

1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3、培養(yǎng)液:直接測(cè)定。

測(cè)定操作表:

 

對(duì)照管

測(cè)定管

試劑一(μl

 

600

試劑二(μl

600

 

40℃溫育3min

酶液(μl

100

100

混勻,40℃反應(yīng)30min

試劑三(μl

300

300

混勻,對(duì)照管調(diào)零,1ml石英比色皿測(cè)定235nm處吸光值A。

酶活性計(jì)算公式:

1. 組織中PL活性

1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:在40℃pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/mg prot= A÷ε×d×V反總÷V×Cpr÷T

= 64.1×A÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/g 鮮重)= A÷ε×d×V反總÷V×W÷V樣總)÷T

= 64.1×A÷W

2. 細(xì)胞PL活性

酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/104cell= A÷ε×d×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

                 = 64.1×A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/ml= A÷ε×d×V反總÷V÷T

= 64.1×A

ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù):5200L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,1mlV樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mlV樣總:加入提取液體積,1ml;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/ml;W,樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,30min

 

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