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測(cè)定意義：

果膠酯酶, 屬果膠酶系,亦稱(chēng)為果膠酶、果膠甲酯酶、果膠氧化酶。催化水解果膠長(zhǎng)鏈上的甲氧酯水解產(chǎn)生小分子物質(zhì)果膠酸和甲醇, 從而增加果膠在水中的溶解度。廣泛存在于高等植物和可以降解細(xì)胞壁的細(xì)菌和真菌中，起內(nèi)源調(diào)控植物細(xì)胞壁上及細(xì)胞之間果膠含量的作用，在食品工業(yè)中具有及其重要的作用和開(kāi)發(fā)前景。

測(cè)定原理：

果膠酯酶催化水解果膠分子釋放H⁺，使反應(yīng)體系的pH下降，用堿液維持體系的pH始終保持在7.8(酚酞指示劑維持在粉紅色)，通過(guò)堿消耗的NaOH量反映果膠酯酶的活性。

試劑的組成和配制：

提取液：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前每瓶加雙蒸水100ml充分溶解。

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加少量蒸餾水溶解，然后轉(zhuǎn)入500ml容量瓶，用蒸餾水定容至500ml。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。易揮發(fā)，使用后及時(shí)用封口膜封口。

試劑四：用蒸餾水將試劑三稀釋5倍，得試劑四。

需自備的儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、烘箱。

樣品處理：

稱(chēng)取1g組織樣品，加入2ml提取液冰浴充分研磨（研缽提前-20℃預(yù)冷10min，提取液提前4℃預(yù)冷。可以根據(jù)客戶(hù)自己的樣本特殊性，自行按比例調(diào)整），12000g、4℃離心15min，取全部上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、試劑一于37℃烘箱保溫10min，樣本全部提取上清（約2ml）分別轉(zhuǎn)移至15 ml離心管或者試管中。

2、向樣本上清中分別加入50μl試劑二，混勻。然后每管加入8 ml試劑一混勻，并用試劑四調(diào)節(jié)pH至7.8（粉紅色）。

3、將上述各離心管或試管放置37℃烘箱60分鐘。每隔20分鐘用試劑四調(diào)節(jié)pH，使pH維持在7.8（粉紅色）。記錄所消耗的試劑四的體積V（ml）。

計(jì)算公式：

酶活定義：每g組織每分鐘消耗1μmol NaOH定義為一個(gè)酶活單位U。

PE活性（U/g）= 20VF/(TW)= VF/(3W)

V：滴定所消耗的試劑四的量，ml；T：反應(yīng)時(shí)間，60 min；F：樣品稀釋倍數(shù)；W：樣品質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1、試劑一提前預(yù)熱，保證酶反應(yīng)速率。

2、實(shí)驗(yàn)前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果酶活力太高，適當(dāng)調(diào)整樣本稀釋倍數(shù)，如將樣品稀釋2-5倍進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。