日本无码人妻丰满熟妇5g影院,人妻无码一区二区,国产精品一区二区在线播放,精品国产乱码久久久久久蜜柚,亚洲AV无码成人精品

測定意義：

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶，廣泛存在于動植物和微生物體內，催化1，3-二磷酸甘油酸轉變?yōu)?/span>3-磷酸甘油酸，產生1分子ATP，具有影響DNA復制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能，廣泛應用于藥物靶標設計。

測定原理：

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

組成：

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2.5 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2.5 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加10 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計、1 ml石英比色皿。

酶液提取:

①總PGK酶提?。?/span>建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體PGK酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液），冰浴勻漿后于4℃，500g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿PGK酶活性，取沉淀加1ml提取液，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測定葉綠體中PGK酶活性。

建議測定總PGK酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的PGK，則按照步驟②提取粗酶液。

測定操作:

1. 分光光度計預熱30min，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。

2. 取1ml石英比色皿，依次加入500μl試劑一，100μl試劑二，50μl試劑三，50μl試劑四，200μl          試劑五，100μl粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

計算公式:

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，1ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g