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胃蛋白酶檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0592 | 售價(jià)（元） | 576 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0592 |
胃蛋白酶（Pepsin）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S） |
100T/48S |
測(cè)定意義：
胃蛋白酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋白酶分泌的減少。
測(cè)定原理：
胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
組成：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0592-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑六：液體 |
3.3ml |
4℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)品：液體 |
1.27ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入10ml試劑二充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入15ml蒸餾水充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1.27ml×1支，0.5μmol/ml酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度4℃保存。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至580nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預(yù)熱30min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μl標(biāo)準(zhǔn)品，40μl試劑二，120μl試劑五，20μl試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測(cè)光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μl蒸餾水，40μl試劑二，120μl試劑五，20μl試劑六，混勻后室溫靜置20min，于 580 nm測(cè)光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)空白管。
5. 對(duì)照管：取 EP管，加入100 μl蒸餾水，置于37℃水浴保溫10min；加入100μl試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入20μl粗酶液，混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl，再加入40μl試劑二，120μl試劑五，20μl試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測(cè)光吸收，記為A空白管。
6. 測(cè)定管：取 EP管，加入20μl粗酶液，100μl試劑三，置于37℃水浴保溫10min；加入100μl試劑四，蓋緊后搖勻1min；8000g 4℃離心10分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl，再加入40μl試劑二，120μl試劑五，20μl試劑六，混勻后室溫靜置20min，于 580 nm測(cè)光吸收，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
a.使用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/ml酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2ml；W：組織質(zhì)量（g）；V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/ml酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2ml；W：組織質(zhì)量（g）；V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min。
注意事項(xiàng)
試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑4℃可保存一周。
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