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細(xì)胞色素b5檢測試劑盒（微量法, 100T/96S）
| 貨號 | SH0610 | 售價（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0610 |
細(xì)胞色素b5檢測試劑盒（微量法, 100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個血紅素蛋白，其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。
測定原理：
氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后，在424nm處有最大吸收峰，通過測定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計算出細(xì)胞色素b5的含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0610-100T/96S |
Storage |
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試劑一：粉劑 |
2瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×2瓶，4℃保存。臨用前各加100ml蒸餾水，充分溶解。
工作液配制：
臨用前配制，戴一次性手套，小心打開試劑三瓶蓋，加試劑二20ml充分溶解，4℃避光可保存1周。
自備儀器和用品：
普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
樣品中細(xì)胞色素b5提取：
1、除去細(xì)胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約0.5g組織，加入1ml試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)入超速離心管中。
2、粗制微粒體：100 000g，4℃離心60min，棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1ml試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4、待測液：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5ml，蓋緊后充分震蕩溶解，即待測液，該待測液需當(dāng)天測定。
細(xì)胞色素b5含量測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min。
2. 工作液置于25℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取1ml玻璃比色皿，加入10 μl蒸餾水，200μl工作液，室溫靜置2 min，424nm和490nm處吸光值，424nm處吸光值記為A空白管1，490nm處吸光值記為A空白管2。△A空白管= A空白管1- A空白管2
4. 測定管：取1ml玻璃比色皿，加入10 μl待測液，200μl工作液，室溫靜置2 min，424nm和490nm處吸光值，424nm處吸光值記為A測定管1，490nm處吸光值記為A測定管2。
△A測定管= A測定管1- A測定管2。
注意：只需要做一個空白管。
樣品細(xì)胞色素b5含量計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
細(xì)胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總÷（Cpr×V樣）
= 122.8×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
細(xì)胞色素b5含量（nmol/g 鮮重）= (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×（V樣總÷V樣）÷W
= 61.4×(△A測定管-△A空白管)÷W
ε：還原型細(xì)胞色素b5納摩爾消光系數(shù)，171×10-6 L/nmol/cm；d：比色皿光徑（cm），1cm； V反總：反應(yīng)體系總體積，210 μl =2.1×10-4 L；Cpr：待測液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V樣：加入反應(yīng)體系中待測液體積，10 μl=0.01 ml；V樣總：待測液總體積，0.5 ml；W：樣品質(zhì)量（g）。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
細(xì)胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總÷（Cpr×V樣）
= 245.6×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
細(xì)胞色素b5含量（nmol/g 鮮重）= (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×（V樣總÷V樣）÷W
= 122.8×(△A測定管-△A空白管)÷W
ε：還原型細(xì)胞色素b5納摩爾消光系數(shù)，171×10-6 L/nmol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.5cm； V反總：反應(yīng)體系總體積，210 μl =2.1×10-4 L；Cpr：待測液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V樣：加入反應(yīng)體系中待測液體積，10 μl=0.01 ml；V樣總：待測液總體積，0.5 ml；W：樣品質(zhì)量（g）。