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DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(DNA熒光型)

貨號(hào) B8202C3 售價(jià)(元) 1900
規(guī)格 48T CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡介
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【產(chǎn)品用途】本產(chǎn)品可應(yīng)用于核酸DNA 的快速擴(kuò)增。

【檢測原理】本產(chǎn)品是基于重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴(kuò)增(Recombinase-aid Amplification,RAA)技術(shù)開發(fā)的恒溫核酸擴(kuò)增檢測試劑,在39℃恒溫條件下特異識(shí)別并擴(kuò)增目標(biāo)樣本的DNA片段,可用Genchek 熒光檢測儀實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)U(kuò)增過程,5-20 min 即可完成擴(kuò)增檢測。

【技術(shù)原理】重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴(kuò)增(Recombinase-aid Amplification,RAA),是一種恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)。從細(xì)菌或真菌中 獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結(jié)合,形成重組酶/引物復(fù)合體,侵入DNA雙鏈核酸模板,在侵入位點(diǎn)重組酶將雙鏈打開,同時(shí)單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合到被重組酶打開的單鏈上,維持雙鏈模板處于開鏈狀態(tài)。重組酶/引物復(fù)合體開始對雙鏈進(jìn)行掃描,當(dāng)引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補(bǔ)序列時(shí),重組酶/引物復(fù)合體解體,DNA聚合酶結(jié)合到引物的3’端,開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板,最終擴(kuò)增產(chǎn)物以指數(shù)級(jí)增長,完成靶標(biāo)基因的擴(kuò)增。經(jīng)過熒光標(biāo)記的探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合,當(dāng)探針被核酸外切酶酶切后發(fā)出熒光信號(hào),可對擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。本試劑盒具有快速、靈敏度高以及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)組分已混合并冷凍干燥成反應(yīng)干粉,操作簡便,易于保存。

【引物設(shè)計(jì)與探針設(shè)計(jì)】

引物設(shè)計(jì)建議方法:RAA核酸擴(kuò)增技術(shù)對引物設(shè)計(jì)的要求與常規(guī)PCR引物設(shè)計(jì)有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對引物,分 別特異性識(shí)別一個(gè)核酸目標(biāo)物的上下游核苷酸序列;引物長度在30-35 nt之間,序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復(fù)序列和內(nèi)部二級(jí)結(jié) 構(gòu)區(qū);引物Tm值不作為設(shè)計(jì)時(shí)主要考慮因素;最佳引物對需通過試驗(yàn)優(yōu)化篩選得到,要求其擴(kuò)增產(chǎn)物為單一條帶,無非特異性擴(kuò)增和明顯的引物二聚體。

探針設(shè)計(jì)建議方法:探針序列不與引物識(shí)別位點(diǎn)重疊,長度在46-52nt之間,序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基; 共有四個(gè)修飾位點(diǎn),距離5’端的28nt的中部位置標(biāo)記一個(gè)dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn);THF位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán),下游標(biāo)記一個(gè)淬滅基團(tuán),兩個(gè)基團(tuán)的間距為2-4 nt,THF 距離3’末端15nt;3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)、生物素、生物素-TEG C3-spacer

建議:在開展RAA (熒光型)擴(kuò)增反應(yīng)之前,先進(jìn)行引物的篩選試驗(yàn),以便得到較高的檢測靈敏度。

產(chǎn)品說明書:B8202C3 DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(RAA熒光型).pdf (251.76 K)

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