細胞系的培養(yǎng)與傳代實驗指南
細胞系的培養(yǎng)與傳代
簡介（INTRODUCTION）
細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，須進行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
材料（MATERIALS）
o 試劑（REAGENTS）
完全培養(yǎng)基（RPML1640或DMEM），胰蛋白酶消化液,1XPBS
o 試劑準備（REAGENT SETUP）
1XPBS:NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g，KH2PO4 0.24g，溶于900ml；雙蒸水中，用鹽酸調pH值至7.4，加水定容至1L,高溫滅菌后4℃保存,也可配制10XPBS室溫保存；
完全培養(yǎng)基：90%液體培養(yǎng)基+10%小牛血清（特殊需要會標注在培養(yǎng)基說明書上）；
胰蛋白酶消化液：0.25g的胰蛋白酶和0.02g的EDTA加入1XPBS，終體積為100ml，pH7.4，0.22um濾過除菌分裝，4℃保存。
o 器械（EQUIPMENT）
EP管、15ml離心管、離心機、細胞培養(yǎng)箱
實驗步驟（PROCEDURE）
貼壁細胞傳代與培養(yǎng) ?預期時間消耗：30min
1. 倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代，并將培養(yǎng)基與PBS置于37℃水浴，
胰酶消化液室溫放置，點燃酒精燈，將所需試劑擺放到相應位置；
2．用1ml槍頭棄去培養(yǎng)皿中上清液，加入3ml 1XPBS洗滌兩遍，加入胰酶消化液1ml，輕輕搖晃后放于細胞培養(yǎng)箱中1min（可酌情增加時長），可以放在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓即可；
3．加入6ml培養(yǎng)基并吹打培養(yǎng)皿底，將細胞移入離心管中，1000rpm 3min離心；
4．棄上清，加入1ml培養(yǎng)基吹打均勻，用細胞計數(shù)板計數(shù)后取需要的細胞數(shù)量加入到新的培養(yǎng)基中，搖晃均勻；
5．放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以每天觀察，期間如果細胞培養(yǎng)基營養(yǎng)不夠可更換成新鮮培養(yǎng)基。
▲關鍵步驟：控制好消化時間，有些貼壁細胞貼壁較緊，需要確保吹打均勻。
懸浮細胞傳代與培養(yǎng) ?預期時間消耗：30min
1．倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代，并將培養(yǎng)基與PBS置于37℃水浴，胰酶消化液室溫放置
2．點燃酒精燈，將所需試劑擺放到相應位置
3．將培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基移入15ml離心管中，800rpm離心5min
4．棄上清，用2ml 1XPBS洗滌兩次，每次800rpm離心5min
5．加入1ml完全培養(yǎng)基，細胞計數(shù)后取需要的細胞數(shù)量加入到新的培養(yǎng)基中，搖晃均勻
▲關鍵步驟：吹打細胞需要輕柔，并且混合均勻。
針對性建議（TROUBLESHOOTING）
細胞培養(yǎng)條件會根據(jù)不同細胞要求不同，以下是總結的條件：
1. 293：人腎上皮細胞， 10%FBS DMEM，從培養(yǎng)皿板底吹下傳代；
2. BHK‐21：幼地鼠腎細胞， 10%FBS DMEM，胰酶消化傳代；
3. NK92：人的 NK 細胞系（懸浮細胞系）， 12.5%FBS +12.5%horseserum α‐mem， 100U/ml 的 IL‐2；
4. MCF‐7：人乳腺癌細胞， 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
5. L929： 1:3 傳代，擴大培養(yǎng)去上清。長滿后取走上清，換新鮮培養(yǎng)基，過 2,3 天可以取用，一共可以取兩批；
6. HT‐29：結腸癌細胞。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
7. 293T： 10%FBS DMEM，從培養(yǎng)皿板底吹下傳代；
8. DC2.4： 10%FBS DMEM，胰酶消化傳代；
9. Hela: 人宮頸癌細胞。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代。 2ml 長三天滿；
10. Thp1: 10%FBS 1640 培養(yǎng)， 3 天一代，細胞長過影響狀態(tài)，小瓶留 2ml 傳代，大瓶留 7ml 傳代；
11. HepG2:人肝癌細胞系。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
12. LO2: 正常 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
13. Huh 7: 人肝癌細胞系。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
14. Hepa1‐6(mice liver cancer cells): 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
15. NCTC 1149(mice liver cells): 10% horse serum DMEM， PBS 沖洗。
沃博生物代理的NEWZERUM新西蘭品牌血清品牌具有百年歷史，血源來源新西蘭和澳大利亞具有出口資質的屠宰場，最大單批次量可達 2000L,確保同一批次質量同時提供充足的血清供應七次無菌過濾，最后三次為0.1 μm無菌過濾處理，進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合國際動物協(xié)會要求。
產品詳情
產品名稱
貨號
規(guī)格
目錄價格
特級胎牛血清
FBS-P500
500ML
6000
特級胎牛血清
FBS-P100
100ML
1200
描述：
內毒素含量極低 <5EU/ml(國際規(guī)定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ，適合各種細胞培養(yǎng)
每個批號血清均具有完整的檢驗報告
七次無菌過濾，最后三次為0.1 μm無菌過濾處理
進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合國際動物協(xié)會要求
每個批號血清庫存量達500-1000升，保證供應充足
特點：
極低內毒素，支持各類難養(yǎng)細胞;
同批號跟蹤發(fā)貨，確保實驗數(shù)據(jù)連續(xù)穩(wěn)定;
海外廠家直供，市場價格透明;
十年誠懇信譽，溫暖售后保證!
建議使用范圍：
科研使用; 細胞培養(yǎng)
推薦血清融化方法：
操作
溫度
100ml
500ml
1000ml
第一步
室溫
35 min
90 min
100 min
15—20℃水浴
5 min
18 min
20 min
第二步
20℃水浴
15 min
25 min
30 min
第三步
37℃水浴
20 min
35 min
45 min
注意：
? 在水浴過程中，血清的平面要完全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動，使血清混勻，但不要產生泡沫!
?胎牛血清不推薦熱滅活。
儲存：
-20°C凍存，4°C保存不超過1個月。反復凍融會破壞血清中有效成分，影響血清品質。
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優(yōu)級胎牛血清
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500ML
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詢價
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