日本无码人妻丰满熟妇5g影院,人妻无码一区二区,国产精品一区二区在线播放,精品国产乱码久久久久久蜜柚,亚洲AV无码成人精品

歡迎蒞臨南京沃博生物科技有限公司官方網(wǎng)站!

當(dāng)前位置: 首頁 - 新聞中心 - 專業(yè)知識

干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染利器——jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染試劑

      干細(xì)胞被認(rèn)為是可用于建模和修復(fù)細(xì)胞功能的最強大和最靈活的細(xì)胞類型。目前干細(xì)胞被廣泛用于藥物篩選、細(xì)胞治療、疾病建模、毒理學(xué)和基因組編輯研究,可以說幾乎用于任何基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究領(lǐng)域。重要的是,其中許多技術(shù)依賴于將基因和/或蛋白質(zhì)成功引入干細(xì)胞,例如CRISPR/Cas9基因編輯。然而,干細(xì)胞,特別是多能干細(xì)胞(即能夠產(chǎn)生任何體細(xì)胞類型的細(xì)胞)特別難以轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染干細(xì)胞時最大的挑戰(zhàn)是細(xì)胞死亡,這在非病毒和病毒轉(zhuǎn)染遞送方法之后都有報道。此外,由于對細(xì)胞死亡的易感性和快速自我更新,干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于其他細(xì)胞類型。

     為了利用基于化學(xué)轉(zhuǎn)染進行基因操作的優(yōu)勢,理想的試劑需要實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率(在干細(xì)胞高于50%的情況下),同時最大限度地減少常見的干細(xì)胞細(xì)胞活力問題。

     在此,本文報道了基于化學(xué)轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS?在三種難轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率的表現(xiàn):間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)、小鼠胚胎干細(xì)胞(mESCs)和人類誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(hiPSCs)。JetOPTIMUS?基于陽離子聚合物,在各種原代細(xì)胞中達到DNA的高轉(zhuǎn)染效率,同時對細(xì)胞活率和形態(tài)的影響最小。此外,還評估了jetOPTIMUS對幾種市售和常用的培養(yǎng)物和底物系統(tǒng)上培養(yǎng)hPSCs的轉(zhuǎn)染效率。

 

結(jié)果與討論

1.jetOPTIMUS?確保原代間充質(zhì)干細(xì)胞在多次傳代時具有高轉(zhuǎn)染效率

 

1:在用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時后,通過流式細(xì)胞術(shù)分析評估轉(zhuǎn)染效率,該質(zhì)粒在培養(yǎng)四個后續(xù)傳代的原代人間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSC)中。

 

2.jetOPTIMUS?在不影響小鼠胚胎干細(xì)胞生存能力的情況下實現(xiàn)了60%以上的轉(zhuǎn)染效率

 

2A:在原代mESCs中用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時后,通過流式細(xì)胞術(shù)分析評估轉(zhuǎn)染效率。

2B:在原代mESCs中用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時后,通過流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞活力。

 

3.jetOPTIMUS?在hiPSC中提供高達80%的轉(zhuǎn)染效率

 

3 A:用jetOPTIMUS?在hiPSC中轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時后,通過流式細(xì)胞術(shù)分析評估轉(zhuǎn)染效率。

3B:用eGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24小時的hPSCs中的GFP表達和相應(yīng)的相位圖像。

 

4.評估jetOPTIMUS?搭配幾種hiPSC培養(yǎng)基和底物的轉(zhuǎn)染效率

 

1A:jetOPTIMUS?在用幾種商業(yè)干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的hiPSC中的轉(zhuǎn)染效率從最高到最低。

 

1B:jetOPTIMUS?在用幾種商業(yè)干細(xì)胞基質(zhì)培養(yǎng)的hiPSC中的轉(zhuǎn)染效率從最高到最低。

 

轉(zhuǎn)染方法:

     質(zhì)粒pCMV_eGFP_Luc(6.4kb)編碼具有巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子的增強型綠色熒光蛋白(eGFP)/螢光素酶的融合蛋白,購自Clontech(#6169-1)。質(zhì)粒pEF1a_eGFP(4.9kb)編碼具有延伸因子-1α(EF1a)啟動子的eGFP,購自Ezyvec(#A626.1)。pCMV_eGFP_Luc用于轉(zhuǎn)染hMSC和mES,pEF1a_eGFP用于轉(zhuǎn)染hiPSC。

 

      轉(zhuǎn)染前72小時,將hMSCs接種在24孔板中,每孔12000個細(xì)胞,接種在500μL相應(yīng)的細(xì)胞維持培養(yǎng)基中,并在37°C下用5%CO2孵育。對于mESCs,在轉(zhuǎn)染前24小時,將細(xì)胞以每孔20000個細(xì)胞的速度接種在500μL mES培養(yǎng)基中的24孔板中,并在37°C下用5%CO2孵育。對于hiPSC,在轉(zhuǎn)染前24小時,將細(xì)胞接種在涂有Corning?Matrigel?基質(zhì)的24孔板中,該基質(zhì)含有2 mL mTeSR培養(yǎng)基和10μM ROCK抑制劑,每孔10萬個細(xì)胞,并在37°C和5%CO2下孵育。

 

      對于hMSCs和hiPCS,在轉(zhuǎn)染前30分鐘,移除培養(yǎng)基并用500μL的MSCBM代替?,不添加補充物,或分別用500μL含有10μM ROCK抑制劑的hiPSCs培養(yǎng)基,將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱。

相關(guān)產(chǎn)品:

貨號

名稱

規(guī)格

101000051

jetOPTIMUs

0.1 ml

101000027

jetPRIME?

0.1 ml

101000036

INTERFERin?

0.1 ml

101000056

jetMESSENGER?

0.1 ml

101000010

PULSin?

0.4 ml

101000040

in vivo-jetPEI?

0.1 ml

101000122

In vivo-jetRNA?+ transfection reagent

1 mL

丰满老熟女一级AA片色欲 | 国产奶头好大揉着好爽 | 北条麻妃无码在线观看 | 9A蜜桃久久久久久免费 | 97久久精品人妻人人搡人人玩 | 性感美女网站在线观看 | 中文字幕在线免费视频 | 四川少妇BBBw搡BBBB搡BBBB | 91无码一区人妻A片蜜 | 少妇一级婬片A片AAAAA在线观看 | 台湾佬美性中文娱乐网 | 国产黄色视频在线观看播放 | 国产又猛又粗又硬又色的视频 | 欧美寡妇一级A片免费视频 91少妇高潮呻吟无码精品 | 一个舔一个插视频免费 | 黄色高清视频在线观看 | 亚洲AV无码蜜桃希岛爱理 | 波多野结衣熟女人妻大脚脚责 | 中文字幕乱码亚洲精品一区 | 国产做爰XXXⅩ高潮视频12p | 欧美寡妇性猛交XXX无码 | 好吊视频一区二区三区 | 成人无码av一区二区三区 | 裸体美女嫩BBB观赏 免费黄色视频在线观看 | 久久99精品亚洲国产 | 免费无码婬片AAAA片蜜桃 | 中文字幕少妇交换乱吟HD免费看 | 五十路熟妇亚洲AV无码 | 日韩mv欧美mv亚洲mv | 亚洲男男射精网站 | 午夜福利理论片在线观看 | 中文字幕日韩精品无码 | 一级特黄色一级视频 | 亚洲午夜精品一区二区 | 红桃视频成人网站免费进 | 99精品在线免费视频 | 四川女人一级毛片视频 | 国产美女裸体黄污网站免费观看 | 近親相姦亂伦中文字幕 | 麻豆柠檬视频在线播放 | 国产精品久久久久久五月天加勒比 |