TSA/PSA是一種成熟的細(xì)胞信號放大技術(shù)，當(dāng)TSA/PSA與我們光穩(wěn)定性、水溶性的結(jié)合后，產(chǎn)生的熒光信號具有比傳統(tǒng)免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光方法產(chǎn)生的信號更高的度和靈敏度。是美國AAT Bioquest自主研發(fā)的與功能類似的信號放大方法，其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來看看吧！
TSA/PSA原理
酪胺信號放大（TSA）是一種基于辣根過氧化酶（HRP）的催化活性對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)（已標(biāo)記熒光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共價鍵結(jié)合位點）產(chǎn)生的大量酶促產(chǎn)物與目標(biāo)蛋白的酪氨酸殘基共價結(jié)合，從而使目標(biāo)蛋白標(biāo)記上特異的熒光或生物素。
圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過類似于傳統(tǒng)ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA試劑可以通過幾個簡單的步驟實現(xiàn)對所需目標(biāo)的靈敏檢測。
表1.TSA/PSA技術(shù)與傳統(tǒng)免疫熒光對比
|
|
TSA/PSA多標(biāo)免疫熒光 |
傳統(tǒng)免疫熒光 |
|
靶點數(shù)目 |
不受限制（多可同時染色7-10種） |
一般標(biāo)記3種（含DAPI）,>3種標(biāo)記難度較大 |
|
一抗種類 |
同一種屬的不同抗體即可滿足要求 |
不同種屬的不同抗體 |
|
二抗種類 |
連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗 |
連接熒光探針的不同種屬二抗 |
|
染色策略 |
任何樣本無需任何染色策略，簡單的重復(fù)前一步的染色過程，樣本/靶點的差異不影響染色過程，使用簡單方便 |
樣本抗原的空間位置的差異，需要設(shè)計復(fù)雜的染色策略。樣本/靶點的差異導(dǎo)致染色策略的差異，染色過程復(fù)雜、多變 |
|
染色效果 |
高染色分辨率和染色特異性，信號強度更強,更穩(wěn)定,淬滅時間更長，無背景影響，各靶點的信噪比大大提高，尤其適合組織基于單細(xì)胞的定量分析 |
亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響，背景較高，對基于單細(xì)胞的定量分析不利。 |
|
實驗成本 |
同一種屬的一抗和二抗，價格相對便宜。 簡單的染色策略和無需任何重復(fù)的預(yù)實驗，即可掌握整個染色技術(shù)，大大縮小了預(yù)實驗的材料損耗。 一抗和二抗工作濃度更低,單次費用更低 |
不同種屬的抗體價格存在差異，一般種屬的價格高。 不同種屬的二抗，價格存在差異，一般的種屬價格高。 尋找合適的染色策略，復(fù)雜的多次重復(fù)的預(yù)實驗大大的增加了實驗成本 |
|
應(yīng)用范圍 |
二抗具備通用性，因此實驗室中所有的研究領(lǐng)域均可使用 |
二抗不具備通用性，實驗室中應(yīng)用領(lǐng)域受到局限 |
TSA/PSA特點
|
TSA |
PSA |
|
1.適用廣，多色標(biāo)記 2.多重標(biāo)記可避免抗體種屬交叉問題 3.染色特異性好，信號強度高，適合低豐度靶標(biāo) 4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈 |
1.檢測靈敏度提高了100多倍，比標(biāo)準(zhǔn)IHC，ICC，IF方法高出100倍 2.改進的熒光信號比酪胺（TSA）試劑高10至50倍 3.PSA 自由基的更高反應(yīng)性允許在HRP-靶相互作用位點更快速，有效和更穩(wěn)定記Styramide綴合物。 4.在不犧牲靈敏度的情況下，PSA可以使用更少量的抗體/探針 |
圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用polyHRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。
圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
圖4.Styramide 超級信號放大試劑盒的信號強度對比。 （A）將HeLa細(xì)胞固定，透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標(biāo)記，建議的稀釋濃度為：1：500。 然后將細(xì)胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分別與HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像，并以相同的曝光時間進行分析。 （B）測量相對熒光信號強度，并比較不同檢測方法之間的強度。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
|
分類 |
貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
Ex(nm) |
Em(nm) |
|
TSA試劑 |
45100 |
iFluor 488 酪胺 |
491 |
514 |
|
45105 |
iFluor 555 酪胺 |
552 |
567 |
|
|
45110 |
iFluor 647 酪胺 |
649 |
665 |
|
|
11070 |
AF488 酪胺 |
491 |
518 |
|
|
11075 |
AF546 酪胺 |
554 |
570 |
|
|
11082 |
AF594 酪胺 |
590 |
617 |
|
|
11065 |
Cy3 酪胺 |
555 |
565 |
|
|
11066 |
Cy5 酪胺 |
644 |
665 |
|
|
11061 |
Azido-Cy5酪胺 |
644 |
665 |
|
|
PSA試劑 |
45000 |
iFluor 350 Styramide |
345 |
442 |
|
45020 |
iFluor 488 Styramide |
491 |
514 |
|
|
45025 |
iFluor 546 Styramide |
541 |
557 |
|
|
45027 |
iFluor 555 Styramide |
552 |
567 |
|
|
45030 |
iFluor 568 Styramide |
568 |
587 |
|
|
45035 |
iFluor 594 Styramide |
592 |
619 |
|
|
45045 |
iFluor 647 Styramide |
649 |
665 |
|
|
45050 |
iFluor 680 Styramide |
676 |
695 |
|
|
45055 |
iFluor 700 Styramide |
685 |
710 |
|
|
45065 |
iFluor 750 Styramide |
749 |
775 |
|
|
45070 |
iFluor 790 Styramide |
782 |
811 |
|
|
試劑盒 |
45200 |
iFluor 350 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
345 |
442 |
|
45205 |
iFluor 488 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
491 |
514 |
|
|
45220 |
iFluor 555 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
552 |
567 |
|
|
45230 |
iFluor 594 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
592 |
619 |
|
|
45240 |
iFluor 647 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
649 |
665 |