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NAD-蘋(píng)果酸酶（NAD-ME ）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0112 | 售價(jià)（元） | 816 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0112 |
NAD-蘋(píng)果酸酶（NAD-ME ）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
測(cè)定意義：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專(zhuān)一性和對(duì)底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
測(cè)定原理：
NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測(cè)定NADH增加速率。
組成：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0112-100T/96S |
Storage |
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提取液： |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在試劑三中加入15ml試劑一和1ml蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 測(cè)定前將檢測(cè)工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、55μl試劑二和160μl工作液，混勻后立即記錄340nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意：如果ΔA＜0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到2分鐘或5分鐘。
NAD-ME活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T= 3617×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T = 3617×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =7.234×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.25×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T= 7234×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T = 7234×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T =14.468×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.25×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。