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ADPG焦磷酸化酶檢測(cè)試劑盒(分光光度 50T/48S)

貨號(hào) SH0270 售價(jià)(元) 2880
規(guī)格 50T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

SH0270

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGP)活性測(cè)定試劑盒(分光光度 50T/48S)

 50T/48S

SH0271

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGP)活性測(cè)定試劑盒(分光光度 25T/24S)

 25T/24S

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。

測(cè)定原理:

AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P,在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH340nm下測(cè)定NADPH增加速率,即可計(jì)算AGP活性。

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

SH0271-25T/24S

SH0270-50T/48S

Storage

提取液液體

25ml

50ml

4

試劑一:液體

20ml

40ml

4

試劑二:粉劑

1

1

4

試劑:粉劑

1

1

-20

說(shuō)明書(shū)

1

SH0271-25T/24S試劑二臨用前加入9ml蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

SH0271-25T/24S試劑三臨用前加入5ml蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

SH0270-50T/48S試劑二臨用前加入18ml蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

SH0270-50T/48S試劑三臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

 

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液制備:

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一置30℃保溫10min以上。

3、在EP管中按順序加入下列試劑

試劑名稱(chēng)μl

測(cè)定管

試劑一

200

試劑二

320

樣本

40

混勻,30℃保溫15 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴迅速冷卻后,4000g4℃離心5min,取上清液,在1ml石英比色皿中依次加入下列試劑

上清液

400

試劑一

425

試劑

175

混勻后,立即于340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A12min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

AGP活性計(jì)算

1、按樣本蛋白蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活性單位。

AGPnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù)

                =2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

AGPnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T×稀釋倍數(shù)

                =2813×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.04ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;稀釋倍數(shù):1.4;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量。

 

 

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