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正式測定前務(wù)必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫”器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。

測定原理：

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。

組成：

試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入1.2ml試劑二充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用；

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、離心機、移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰

樣品測定的準備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，30℃準確水浴30min后，95℃水浴10min，冷卻至室溫

95℃水浴5min左右，冷卻至室溫

混勻，540nm下測定各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需

要設(shè)一個對照管。

SS-Ⅰ活性計算:

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492；x為標準品濃度（μg/ml），y為ΔA。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.1ml； V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。