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蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

貨號 SH0299 售價(元) 1416
規(guī)格 100T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0299

蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

100管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

蔗糖是源(葉片等)光合產(chǎn)物向器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是雙向反應(yīng)酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。

測定原理:

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0299-100T/48S

Storage

提取液:

100ml

4℃

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

5ml

4℃

試劑三:粉劑

2

-20

試劑液體

6ml

4℃

說明書

一份

試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前每支加入1.2ml試劑二充分溶解待用,現(xiàn)配現(xiàn)用;

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

樣品測定的準(zhǔn)備:

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 

測定步驟:

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 加樣表(1.5ml棕色EP管中按下表依次加樣):

試劑名稱(μl

測定管

對照管

樣本

10

10

試劑三

40

 

試劑一

 

40

混勻,30℃準(zhǔn)確水浴30min后,95℃水浴10min

試劑四

50

50

95℃水浴5min左右,冷卻至室溫

蒸餾水

400

400

混勻,取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下測定各管

吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

SS-Ⅰ活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/ml),yΔA。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V÷V樣總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.05ml; V樣:加入樣本體積,0.01 ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,30 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g。

b.96孔板測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0006x - 0.0492;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/ml),yΔA。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(V×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(W× V÷V樣總) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.05ml; V樣:加入樣本體積,0.01 mlV樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g。

 

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