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蔗糖合成酶(合成方向;SS-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

貨號(hào) SH0301 售價(jià)(元) 1800
規(guī)格 100T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0301

蔗糖合成酶(合成方向;SS-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

100管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

蔗糖是源(葉片等)光合產(chǎn)物向庫(kù)器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13是雙向反應(yīng)酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性對(duì)于植物蔗糖合成具有重要意義。

測(cè)定原理:

SS-催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應(yīng)生成蔗糖,蔗糖與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小與顏色的深淺成正比。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0301-100T/48S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

2.5ml

-20℃

試劑二蔗糖溶液

10ml

4℃

試劑三液體

2ml

4℃

試劑液體

25ml

4℃

試劑液體

6ml

4℃避光

說明書

一份

試劑二:1000μg/ml蔗糖溶液10ml×1瓶,4℃保存;

試劑五:液體6ml×1瓶,4℃避光保存;

自備儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定(EP管中加入下列試劑):

試劑名稱(μl

測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

10

10

 

 

蒸餾水

 

45

45

55

試劑二

 

 

10

 

試劑一

45

 

 

 

混勻,25℃準(zhǔn)確水浴10min

試劑三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸10min左右(蓋緊,以防止水分散失),冷卻

試劑四

210

210

210

210

試劑五

60

60

60

60

混勻,沸水浴30min,冷卻后,取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下測(cè)定各管吸光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

SS-Ⅱ活性計(jì)算

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×A測(cè)定管-A對(duì)照管A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×A測(cè)定管-A對(duì)照管A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g鮮重) = C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×A測(cè)定管-A對(duì)照管A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×A測(cè)定管-A對(duì)照管A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,1000μg/ml;V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01ml; V2:加入提取液體積,1ml;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本鮮重,g:反應(yīng)時(shí)間:10min。

 

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