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糖原磷酸化酶b（GPb）檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/48S)
| 貨號(hào) | SH0495 | 售價(jià)（元） | 1800 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0495 |
糖原磷酸化酶b（GPb）檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/48S) |
100管/48樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。
測(cè)定原理：
GP催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測(cè)定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）時(shí)測(cè)定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）時(shí)測(cè)定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0495-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
16ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑五：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零；
2、 工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 試劑三的配制：臨用前在試劑三瓶中加入1ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、 試劑四的配制：臨用前在試劑四瓶中加入1ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
5、 試劑五的配制：臨用前在試劑五管中加入500μl蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
6、 將工作液、試劑三、試劑四和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘；
7、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、10μl試劑三、10μl試劑四、10μl蒸餾水和160μl工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A1和10min后的吸光值A2，計(jì)算ΔAGPa=A2-A1。
8、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、10μl試劑三、10μl試劑四、10μl試劑五和160μl工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A3和10min后的吸光值A4，計(jì)算ΔAGP=A4-A3。
注意：由于每個(gè)樣本需要同時(shí)測(cè)一個(gè)GP（GPa和GPb）活性和一個(gè)GPa活性，因此本試劑盒100管測(cè)48個(gè)樣本。
GPb活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GPb（nmol/min/g 鮮重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GPb（nmol/min/g 鮮重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1286×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。